クローニング

クローニングとは？

遺伝子クローニングとは、生物から抽出したすべてのDNAの中から、目的の遺伝子を探し出してコピー（クローン化）することである。

遺伝子クローニングの基本的な手順

1.　目的の遺伝子を持つとされる生物から抽出したDNAを制限酵素で遺伝子サイズに切断する。

2.　バクテリアのプラスミドも同じ制限酵素で切断する。

3.　遺伝子サイズのDNAと切断したプラスミドを1つの試験管にまとめる。多くの場合、プラスミドと遺伝子サイズのDNAはアニーリングして、組み換えプラスミド（組み換えDNA）を形成する。

4.　組換えプラスミドは、エレクトロポレーションやヒートショックを用いてバクテリアに移される。

5.　バクテリアをプレートに移し、コロニーを形成させる。すべてのプレート上のすべてのコロニーを遺伝子ライブラリーと呼ぶ。

6.　遺伝子ライブラリーをスクリーニングして、目的の遺伝子を含むコロニーを特定するには、以下の3つのうちの1つを調べる。
目的の遺伝子または極めて類似した遺伝子のDNA配列
目的の遺伝子がコードするタンパク質
目的の遺伝子に近い位置にマッピングされたDNAマーカー
 

この記事の著者：仲田洋美医師
医籍登録番号　第371210号
日本内科学会　総合内科専門医　第7900号
日本臨床腫瘍学会　がん薬物療法専門医　第1000001号
臨床遺伝専門医制度委員会認定　臨床遺伝専門医　第755号